**Técnicas de Microscopía y Técnicas Auxiliares**

**Tipos de Microscopios**

• Microscopio Electrónico (ME)
• Microscopio Electrónico de Transmisión (MET)
• Microscopio Electrónico de Barrido (MEB)
• Microscopio de Fuerza Atómica (MFA)

**Técnicas Auxiliares**

• Histoquímica y Citoquímica
• Inmunohistoquímica y Técnicas de Hibridación
• Autorradiografía
• Cultivo de Tejidos y Órganos
• Separación de Células y Orgánulos por Centrifugación Diferencial
• Microscopios y Técnicas Microscópicas Especializadas

**Equivalencias en las Medidas de Longitud**

• 1 picómetro (pm) = 0,01 angstroms (Å)
• 1 angstrom = 0,1 nanómetros
• 10 angstrom = 1,0 nanómetro
• 1 nanómetro = 1000 picómetros
• 1000 nanómetros = 1,0 micrómetros (µm)
• 1000 micrómetros = 1,0 milímetros (mm)

**Preparación de Tejido: Tinción con Hematoxilina-Eosina y Fijación con Formalina**

**1. Fijación**

1. Abolir el metabolismo celular.
2. Impedir la degradación enzimática de las células y tejidos por la autolisis (autodigestión).
3. Destruir microorganismos patógenos.
4. Endurecer el tejido como resultado de la formación de enlaces cruzados o la desnaturalización de moléculas proteicas.

**2. Inclusión en Parafina**

1. Permite cortes de 5 µm a 15 µm.
2. Luego, la muestra se lava y deshidrata con alcohol creciente hasta 100%.
3. Aclarado con xileno o tolueno.

**3. Tinción**

1. Hematoxilina en agua, eosina soluble en alcohol.

**Otras Técnicas de Tinción**

• Hematoxilina-Eosina: Se utiliza principalmente para poner en evidencia las características estructurales. No permite ver de forma adecuada ciertos componentes estructurales de los cortes histológicos, tales como elastina, fibras reticulares, membranas basales y lípidos.
• Para estudiar estos componentes, se deben usar otros procedimientos de tinción, en su mayoría selectivos.
• Incluyen orceína y fucsina-resorcina para material elástico y la impregnación argéntica para fibras reticulares y membranas basales.
• Es importante saber lo que el método permite ver.

**Sangre**

• Tejido conectivo adaptado para circular dentro de los vasos.
• Matriz extracelular: plasma (líquido).
• La sangre es roja y contiene varios tipos de células:
• Eritrocitos (derivado celular)
• Leucocitos (célula completa)
• Plaquetas (derivado celular), fragmento de célula no circulante.
• Las células de la sangre reciben el nombre de elementos figurados.

**Medio Interno del Organismo**

• Sangre
• Linfa
• Líquido intersticial
• Circula por los vasos sanguíneos; fuera de ellos, coagula, y las células se aglutinan junto con componentes del plasma. El sobrenadante del coágulo es un líquido amarillento llamado suero.

**Características de la Sangre**

• Volemia: El volumen de sangre es aproximadamente el 8% del peso corporal. Un individuo de 63 kg tiene una volemia de 5 litros.
• Plasma: 55% del volumen sanguíneo
• Elementos figurados: 45% del volumen sanguíneo
• pH sanguíneo: 7,3 a 7,5
• Densidad: 1,055 a 1,060
• Viscosidad: 4,50 a 5,30 en varones y 3,0 a 4,90 en mujeres.
• Vehículo que emplea el organismo para transportar sustancias de un punto a otro.
• Transporta sustancias nutritivas, desechos metabólicos, O₂ y CO₂, vitaminas, iones, hormonas, elementos del sistema inmunitario, etc.
• Regula el equilibrio ácido-básico del medio interno y la temperatura corporal.

**Plasma Sanguíneo**

• Líquido amarillo pálido, compuesto por agua (90% de su volumen), iones, proteínas, lípidos y glúcidos.
• Iones más importantes: Na⁺, K⁺, Cl^–, Ca⁺⁺, Mg⁺⁺, PO₄^–, CO₃^– y SO₄^–
• Proteínas: 100 ml de plasma contienen entre 6 y 8 gramos de proteínas:
  1. Albúmina (presión coloidosmótica, que mantiene el volumen sanguíneo).
  2. Globulinas alfa y beta, que transportan sustancias liposolubles e iones metálicos.
  3. Gammaglobulinas o inmunoglobulinas, es decir, los anticuerpos circulantes.
  4. El complemento, constituido por proteínas del sistema inmunitario.
  5. Varias proteínas que intervienen en la coagulación, por ejemplo, fibrinógeno y protrombina.
  6. Hormonas proteicas.
  7. Además, aminoácidos, sustancias derivadas del metabolismo proteico (urea, ácido úrico, creatinina, etc.).
• Lípidos: Cada 100 ml de plasma contienen 600 y 760 mg de lípidos.
  1. Colesterol, transportado por la lipoproteína LDL.
  2. Triglicéridos, circulan desde el intestino hasta el hígado agrupados en pequeñas gotitas llamadas quilomicrones, y que son transportados desde el hígado hasta los tejidos por la lipoproteína plasmática VLDL.
  3. Hormonas esteroideas.
• Glúcidos: Principalmente glucosa. 100 ml de plasma contienen entre 70 y 120 mg de monosacáridos; aumenta después de las comidas.
• Pigmentos:
  • Pigmentos endógenos como la bilirrubina, derivado de la degradación de la hemoglobina.
  • Pigmentos exógenos: derivan de la ingestión de alimentos que contienen lipocromos o carotenos.

**Elementos Figurados**

**Eritrocitos, Glóbulos Rojos o Hematíes**

• Forma de disco bicóncavo.
• Miden entre 6,5 y 8 µm de diámetro.
• Son flexibles, lo que les permite circular por capilares más pequeños.
• Mujer: 4.800.000 eritrocitos/ml
• Hombre: 5.400.000/ml

**Análisis Relacionados con los Eritrocitos**

• Hematocrito: Análisis que determina el volumen de los eritrocitos en relación con el volumen de la sangre.
• Eritrocitos: representan el 44% del volumen total.
• Leucocitos: 1%
• Plasma: 55%
• Eritrosedimentación: Análisis que mide la velocidad con la que los eritrocitos se separan del plasma y sedimentan. La sangre se trata con anticoagulantes y se coloca en una pipeta capilar inmóvil. Luego de una hora se mide con una regla. En individuos normales es de 2 a 12 mm.

**Características de los Eritrocitos**

• No poseen núcleo ni orgánulos y su membrana plasmática está asociada a un citoesqueleto singular.
• Debajo de la membrana hay una malla de filamentos de espectrina, proteína heterodimérica compuesta por dos polipéptidos largos entrelazados, llamados alfa y beta.
• Contienen hemoglobina, que confiere un color rojizo cuando la sangre se extiende, sin teñir, sobre un portaobjetos.

**Hemoglobina y Hematosis**

• Hemoglobina: Molécula responsable de la función principal del eritrocito, transportar O₂ y, en parte, CO₂, gases con los que la hemoglobina se une en forma inestable. Es una proteína conjugada de 68 kDa.
• Hematosis: Cuando los eritrocitos circulan por los capilares sanguíneos de los alvéolos pulmonares, intercambian esos gases con los del aire. Transfieren el CO₂ de la sangre al alvéolo y el O₂ del aire al eritrocito.

**Leucocitos**

**Clasificación**

• Granulocitos: Tienen gránulos específicos.
  • Neutrófilos
  • Eosinófilos
  • Basófilos
• Agranulocitos:
  • Linfocitos
  • Monocitos

**Neutrófilos**

• Miden entre 12 y 15 µm de diámetro.
• Se identifican por la forma de su núcleo, de 2 a 5 lobulaciones unidos por puentes de cromatina (también conocido como granulocito polimorfonuclear).
• Dos clases de granulocitos citoplasmáticos:
• Granulocitos azurófilos:
• Granulocitos específicos: 20% de los gránulos, son lisosomas, miden 0,5 µm de diámetro. Contienen mieloperoxidasa, peroxidasa, lisozima, colagenasa, elastasas, fosfatasas alcalinas y fagocitinas. La mayoría con propiedades bactericidas.
• Se desarrollan en la médula ósea.
• Pueden pasar al tejido conectivo a través de los endotelios de capilares y vénulas.

**Eosinófilos**

• Miden entre 10 y 16 µm.
• Núcleo bilobulado.
• Gránulos citoplasmáticos un poco más grandes que los de los neutrófilos.
• Poco tiempo en sangre y pasan al tejido conectivo donde viven entre 7 y 12 días.
• Intervienen en alergias y reacciones inmunológicas a parásitos.
• Cooperan con los mastocitos del tejido conectivo, que atraen a los eosinófilos mediante sustancias que liberan en el tejido afectado.
• Cuando arriban a este, los eosinófilos liberan sustancias de sus gránulos, que actúan contra el microorganismo agresor. A veces, esas sustancias se depositan en el tejido infectado (cristales de Charcot-Leyden).

**Basófilos**

• Miden entre 10 y 12 micras, son los granulocitos más pequeños.
• Núcleo con forma de “U” con dos o más lóbulos unidos por puentes de cromatina.
• Gránulos de 0,5 µm, se colorean intensamente, que suelen ocultar el núcleo, contienen histamina y heparina (metacromasia al teñir con azul de toluidina).
• El basófilo interviene en reacciones alérgicas.
• Cuando ingresa una sustancia alergénica al organismo, un clon de linfocitos B produce una IgE específica, mientras los basófilos elaboran receptores capaces de unirse a ella.

**Linfocitos**

• 20 a 30% de los leucocitos.
• Aumentan con las infecciones.
• Mayor en niños por el contacto con antígenos nuevos.
• La mayoría mide entre 7 y 8 µm.
• Los más grandes miden de 9 a 12 µm y los de 13 a 18 µm.
• Linfocitos pequeños, medianos y grandes.
• Citoplasma pequeño, basófilo, escasos gránulos azurófilos.
• Núcleo esférico y pequeña escotadura en uno de sus lados.

**Clasificación de los Linfocitos**

• Independientemente del tamaño, se clasifican en:
• Linfocitos T (80%): Se forman en la médula ósea, de células predecesoras que se convierten en linfocitos Pre-T, los cuales arriban a través de la sangre al timo, el cual abandonan y se van a órganos linfáticos secundarios. La vida media del linfocito T se calcula en años.
  • Citotóxicos
  • Colaboradores
• Linfocitos B (15%)
• Linfocitos Nulos (5%)

**Tejido Conjuntivo**

• Células
• Matriz Extracelular (MEC):
  • Fibras proteicas (colágeno, elásticas y reticulares)
  • Sustancia fundamental, componente amorfo que contiene moléculas especializadas (proteoglicanos, glucoproteínas multiadhesivas y glucosaminoglicanos).

El tejido conjuntivo forma un compartimento vasto y continuo por todo el cuerpo, delimitado por las láminas basales de los diversos epitelios y por las láminas basales o externas de las células musculares y las células de sostén de los nervios.

**Funciones de los Diferentes Tipos de Tejido Conjuntivo**

• Tejido conjuntivo laxo: Muchos tipos de células; el fibroblasto produce las fibras extracelulares que cumplen una tarea estructural en el tejido; también producen y mantienen la sustancia fundamental. Linfocitos, células plasmáticas, macrófagos y eosinófilos están asociados con el sistema de defensa del cuerpo y funcionan dentro de la MEC del tejido.
• Tejido óseo: Contiene un tipo de célula, el osteocito, que produce las fibras que componen la mayor parte del tejido óseo.

**Clasificación del Tejido Conjuntivo**

• Mesenquimatoso
• Tejido conjuntivo mucoso
• Tejido conjuntivo laxo
• Tejido conjuntivo denso
  • Irregular
  • Regular
• Tejido conjuntivo especializado:
  • Tejido cartilaginoso
  • Tejido sanguíneo
  • Tejido óseo
  • Tejido hematopoyético
  • Tejido adiposo
  • Tejido linfático

**Tejido Conjuntivo Embrionario**

• El mesénquima embrionario se origina de los diversos tejidos conjuntivos del cuerpo.
• Mesodermo, capa media del embrión, da origen a casi todos los tejidos conjuntivos del cuerpo. Excepción: región de la cabeza, donde las células progenitoras específicas derivan del ectodermo por medio de las células de la cresta neural.
• Embrión:
• Tejido conjuntivo primitivo, conocido como mesénquima (en la región de la cabeza conocido como ectomesénquima).
• Además, da origen al tejido muscular, vascular y urogenital, y a las membranas serosas que tapizan las cavidades corporales.
• El tejido conjuntivo embrionario está presente en el embrión y dentro del cordón umbilical.

**Clasificación del Tejido Conjuntivo Embrionario**

1. Mesénquima: Principalmente en el embrión. Pequeñas células fusiformes de aspecto relativamente uniforme.
2. Tejido conjuntivo mucoso: Se halla en el cordón umbilical. Consiste en una MEC especializada, de aspecto gelatinoso, compuesta principalmente por ácido hialurónico. La sustancia fundamental de este tejido se denomina gelatina de Wharton.

**Tejido Conjuntivo del Adulto**

• Tejido conjuntivo laxo: Fibras poco ordenadas y abundancia de células de todo tipo.
• Tejido conjuntivo denso:
  • Tejido conjuntivo denso regular: Formaciones densas y ordenadas de fibras y células; tendones, ligamentos y aponeurosis.
  • Tejido conjuntivo denso irregular.

**Fibras del Tejido Conjuntivo**

1. Fibras de colágeno, colágeno tipo I.
2. Fibras reticulares, colágeno tipo III, tinción reacción ácido peryódico de Schiff (PAS), impregnación argéntica (Gomori y Wilder), fibras negras al teñir con plata (argirófilas).

**Célula, Tejidos y Tipos de Tejidos**

• Célula: Es la unidad básica funcional del organismo.
• Tejidos: Cúmulo o grupo de células organizadas para llevar a cabo una o más funciones específicas. Un conjunto organizado de células que funcionan en forma colectiva reciben el nombre de tejido (fr., tissu, tejido; lat., texo, tejer).
• Células de un mismo tejido se conectan entre sí por uniones de anclaje especializadas (uniones célula-célula).

**Tipos de Tejidos**

• Tejido epitelial: Cubre las superficies corporales, reviste las cavidades del cuerpo y forma glándulas.
• Tejido conjuntivo: Subyace o sostiene estructural y funcionalmente a los otros tres tejidos básicos.
• Tejido muscular: Está compuesto por células contráctiles y es responsable del movimiento.
• Tejido nervioso: Recibe, transmite e integra información del medio interno y externo para controlar las actividades del organismo.

**Epitelios y Glándulas: Generalidades**

• El epitelio tapiza las superficies del cuerpo, reviste las cavidades corporales y forma glándulas.
• Tejido avascular, compuesto por células que recubren las superficies externas del cuerpo y revisten las cavidades internas cerradas y los conductos corporales que comunican con el exterior.
• Forma la porción secretora (parénquima) de las glándulas.
• Especializadas: receptores sensoriales.
• Dispuestas muy cerca unas de otras.
• Tienen polaridad.

**Tipos de Epitelios**

• Plano simple:
  • Ubicación: sistema cardiovascular.
  • Función: intercambio, barrera del SNC.
• Cúbico simple:
  • Ubicación: pequeños conductos de glándulas exocrinas.
  • Función: absorción y conducción.
• Cilíndrico simple:
  • Ubicación: intestino delgado y colon.
  • Función: absorción y conducción.
• Cilíndrico simple:
  • Ubicación: intestino delgado y colon.
  • Función: absorción, secreción.
• Seudoestratificado:
  • Ubicación: tráquea y árbol bronquial.
  • Función: secreción y conducción.
• Plano estratificado:
  • Ubicación: epidermis, cavidad bucal.
  • Función: barrera y protección.
• Cúbico estratificado:
  • Ubicación: grandes conductos de las glándulas exocrinas.
  • Función: barrera y protección.
• Cilíndrico estratificado:
  • Ubicación: igual al anterior.
  • Función: barrera y conducción.
• De transición:
  • Ubicación: cálices renales.
  • Función: barrera, distensibilidad.