Práctica: Identificación de Staphylococcus y Streptococcus
Staphylococcus
Staphylococcus se encuentra en forma de racimo y es Gram (+).
Representantes:
- Staphylococcus aureus
- Staphylococcus epidermidis
- Staphylococcus saprophyticus
El que causa más problemas es Staphylococcus aureus.
Para aislar Staphylococcus aureus a partir de una muestra, es necesario utilizar medios de cultivo selectivos para Gram (+). Uno de estos medios selectivos es el Agar Manitol Salado.
A partir de la muestra problema, se realiza un sembrado por estrías por agotamiento en superficie, se incuba y se obtendrán dos tipos de colonias:
- Amarillas: Staphylococcus aureus
- Blancas: Pueden ser Staphylococcus epidermidis y Staphylococcus saprophyticus
Identificación Bioquímica de Staphylococcus aureus:
- Primeramente: Prueba de la Coagulasa
- Secundariamente: Prueba de DNasa
Las colonias amarillas se toman para cultivo puro.
Prueba de la Coagulasa:
Para determinar la prueba de la coagulasa, se utiliza un tubo que contiene plasma humano (se incuba a 37°C por 4-24 horas).
En el plasma está presente fibrinógeno, que hace que se formen coágulos:
- Coágulo pequeño: (+)
- Coágulo más grande: (++)
- Coágulo mucho más grande: (+++)
- Coágulo abarca todo: (++++)
- Si no hay coágulo: Negativo
Cualquiera sea la presencia de coágulo (+, ++, +++, etc.), el Staphylococcus es patógeno.
Si es coagulasa negativo, no es patógeno, a pesar de ser aureus.
Prueba de DNasa:
Es complementaria.
- Se realiza en una placa que contenga Agar ADN, con cultivo puro.
- Se cultiva por 24 horas.
- Se observa el crecimiento de Staphylococcus. Para probar si contiene la enzima DNasa, a este medio de cultivo se le añade ácido clorhídrico.
- Si tiene DNasa, significa que esta enzima ha degradado el ADN. Con la presencia del ácido clorhídrico, se formará un halo transparente en un medio opaco.
Lo que determina la patogenicidad es la prueba de la coagulasa.
Streptococcus
Está representado por varios grupos: A, B, E, F, etc.
Cocos en cadena, y también pueden crecer en Agar Sangre. De acuerdo con esta forma de crecimiento, vamos a obtener colonias que pueden tener estos tipos de hemolisinas:
- Alfa Hemólisis: Destruye parcialmente los glóbulos rojos. En el Agar Sangre se observará su presencia con un halo verdoso.
- Beta Hemólisis: Destruye totalmente los glóbulos rojos y el halo es transparente.
Teniendo en cuenta la hemólisis alfa y beta hemolíticas, van a estar clasificados en una forma conocida como:
Clasificación de Lancefield
Esta determina Streptococcus de tipo:
- Grupo A: Principal representante: Streptococcus pyogenes.
- Grupo B: Principal representante: Streptococcus agalactiae.
- Grupo C, E, F, G, etc.: Todos estos van a ser beta hemolíticos.
- Grupo D: Van a ser alfa hemolíticos.
Bacteria importante causa de problemas a nivel de las vías respiratorias, principalmente en los niños, es Streptococcus pneumoniae (también es alfa hemolítico).
Streptococcus solo crece en Agar Sangre.
Sensibilidad: Pruebas para clasificar Streptococcus
- Bacitracina: Se siembra en placa Agar Sangre, se incuba a 24-48 horas. Se observa presencia o ausencia de halo.
- Optoquina
- Prueba de CAMP: Significa Christie Atkins Munch Petersen
En una placa Petri con la cepa de Staphylococcus aureus (beta hemolítico), incubada a 37°C de 24 a 48 horas, se observa un halo transparente en forma de flecha que indica la presencia de un tipo de Streptococcus agalactiae, es CAMP (+).
- Hidrólisis: Hipurato y Esculina
Se siembra y si hay hidrólisis de hipurato, se clarifica.
En la esculina, se clarifica, pero en este caso se formará un precipitado de color negro.
- Metabolismo de la Inulina: (-) o (+)
Si la inulina es transparente, es (+).
- Desarrollo en NaCl 6.5%: (-) o (+)
Si hay crecimiento, hay turbidez, que significa (+); si no crece, (-).
- Lisis por Bilis
- Desoxicolato de Sodio
Cuando se habla de sensible, es S o R. Cuando se habla de CAMP, es POSITIVO o VIVO. Cuando hay hidrólisis, es (-) o (+).
Todo se siembra en Agar Sangre.
Pruebas para identificar Pneumoniae:
Una de ellas es la Inulina.
Cómo saber si es Streptococcus o Staphylococcus si está con beta hemólisis:
La prueba de catalasa: si es (+), es Staphylococcus; y si es (-), es Streptococcus. Ambas bacterias producen hemolisina.
Estas bacterias también pueden producir otro tipo de enzimas conocidos como leucosilina (defiende).
Cuando muere un glóbulo blanco, se convierte en piocito.
El conjunto de piocitos se convierte en pus.
Bacterias Piogenas:
Bacterias capaces de causar destrucción a los glóbulos blancos y producen pus.
Después de identificar la bacteria, se indica un antibiograma.
La resistencia de las bacterias a los fármacos se debe a los plásmidos (fragmentos de ADN presentes en el citoplasma).
Streptococcus más común es el neumococo. El diplococo se hace virulento cuando hay presencia de cápsula.
Si se siembra en Agar Sangre, las colonias salen rugosas.
Si se siembra en Agar Sangre, las colonias crecen lisas transparentes.
Prueba que se utiliza con ratones de laboratorio: se inocula la cepa inactiva al ratón, y este vive.
Se le inocula a otro ratón la cepa inactiva + cepa viva: el ratón muere, y libera su ADN, y este ADN está incorporado y como ese ADN tiene el gen genera la cápsula, se ha vuelto virulenta. Se da un proceso de transformación.