Técnica Histológica: Concepto y Aplicaciones
La técnica histológica es el procedimiento mediante el cual se preparan estructuras biológicas para su observación y estudio al microscopio. Este proceso es fundamental para comprender la microanatomía de los tejidos y diagnosticar enfermedades.
Pasos de la Técnica Histológica
El proceso histológico comprende una serie de pasos esenciales:
- Obtención del material
- Fijación
- Inclusión
- Corte
- Coloración
- Montaje
- Archivo
En el caso de tejidos mineralizados, se añade un paso extra entre la fijación y la inclusión: la desmineralización.
Obtención del Material
El material biológico se puede obtener mediante:
- Biopsia: Extracción de un fragmento de tejido o líquido orgánico de un organismo vivo para diagnóstico y tratamiento.
- Necropsia: Obtención de fragmentos de tejido de un organismo muerto.
Fijación
La fijación detiene los procesos celulares dinámicos de forma rápida y eficaz, preservando la estructura biológica. Los fijadores más comunes son:
- Formol al 10%
- Alcohol
- Bouin
Características de un buen fijador:
- Alta capacidad de penetración.
- Relación de volumen fijador/tejido de 25:1.
- Acceso del fijador a todas las partes del tejido.
Inclusión
La inclusión proporciona consistencia a las muestras para obtener secciones delgadas para la coloración. Los medios de inclusión más habituales son:
- Resina acrílica
- Parafina
- Congelación
Inclusión en Parafina
Las parafinas son hidrocarburos saturados cuyo punto de fusión depende de la longitud de sus cadenas.
Inclusión por Congelación
Consiste en la congelación rápida del tejido y su posterior deshidratación al vacío a bajas temperaturas. Es una técnica rápida, pero no permite cortes seriados.
Inclusión en Resina Acrílica
(No se proporciona información adicional en el texto original, pero se podría ampliar este apartado si se desea).
Corte
El corte reduce la muestra a láminas delgadas para su observación microscópica. Los cortes deben ser delgados, uniformes y homogéneos.
Micrótomo: Dispositivo mecánico para realizar cortes. Consta de una sección fija con cuchillas y una sección móvil donde se coloca la muestra.
Coloración
Los colorantes son sustancias que permiten teñir tejidos, que suelen ser transparentes, para su observación al microscopio. Se clasifican en:
- Ortocromáticos: El tejido adquiere el mismo color que la solución colorante.
- Metacromáticos: Tiñen algunas estructuras del mismo color que la solución y otras de diferente color.
- Directos: Solo se utiliza un colorante.
- Indirectos: Requieren sustancias intermediarias (mordientes).
- Progresivos: Actúan gradualmente hasta un punto óptimo.
- Regresivos: Se sobrecolorean y luego se diferencian.
- Difusos: Tiñen homogéneamente todos los elementos.
- Electivos: Tiñen ciertos tipos de elementos.
- Específicos: Presentan un alto grado de selectividad.
Coloración de Hematoxilina y Eosina (HE)
La Hematoxilina es un colorante natural, básico y progresivo. La Eosina es un colorante artificial, ácido y regresivo.
Pasos de la coloración HE:
- Desparafinado: Eliminación de la parafina del preparado.
- Hidratación: Uso de alcoholes en grado decreciente para introducir agua.
- Aplicación de hematoxilina: Por inmersión o goteo, durante 15 minutos, filtrando la solución. Controlar al microscopio.
- Viraje de la hematoxilina: Agua corriente durante 15 minutos.
- Lavado con agua destilada: Elimina residuos de agua corriente.
- Coloración con eosina: Por goteo o inmersión, durante 0.5 a 1 minuto.
- Diferenciación: Ajuste del color de la eosina. Controlar al microscopio.
- Deshidratación: Eliminación del agua con alcoholes en grado creciente.
- Aclaramiento: Con carboxilol y xilol.
Montaje
El montaje consiste en colocar los cortes en un portaobjetos, añadir un medio de montaje transparente (para unir los vidrios) y cubrir con un cubreobjetos para proteger el preparado.
Estudio de Tejidos Duros
Los tejidos duros se pueden estudiar mediante:
- Técnica de desgaste: Estudia la parte mineralizada.
- Desmineralización: Estudia las partes blandas no mineralizadas.
Cortes por Desgaste
Se obtienen por frotación del tejido mineralizado sobre una piedra. Es un método sencillo que permite cortes longitudinales y transversales.
Cortes por Desmineralización
La desmineralización (o reblandecimiento) elimina las sales minerales de los tejidos duros antes del corte. Se debe realizar por congelación con previa fijación. La desmineralización por ácidos no debe ser prolongada.