Reactivos y Soluciones Tamponadas en Citogenética

Reactivo PBS-NaCl

• KCl: 0,25 g
• Na2HPO4: 1,44 g
• KH2PO4: 0,25 g
• Agua destilada: hasta 1000 ml

Tampón Fosfato pH 6,7

• Solución A:
  • Fosfato disódico (Na2HPO4): 946 mg
  • Agua destilada: hasta 100 ml
• Solución B:
  • Fosfato de potasio dihidrógeno (KH2PO4): 907 mg
  • Agua destilada: hasta 100 ml
• Solución de trabajo:
  • Solución A: 43 ml
  • Solución B: 57 ml

Fórmula Cromosómica: Interpretación y Anomalías

La fórmula cromosómica describe la constitución cromosómica de un individuo. Se inicia con el número total de cromosomas, seguido de una coma y la especificación de los cromosomas sexuales.

Fórmula Cromosómica Normal

• 46,XX: Cariotipo normal de una mujer.
• 46,XY: Cariotipo normal de un varón.

Anomalías Numéricas

Las anomalías numéricas afectan el número total de cromosomas.

• Cromosomas sexuales:
  • 45,X: Monosomía del cromosoma X (Síndrome de Turner).
  • 47,XYY: Disomía del cromosoma Y (Síndrome del duplo Y).
  • 47,XXY: Síndrome de Klinefelter.
• Autosomas:
  • 45,XX,-21: Monosomía del cromosoma 21 (mujer).
  • 47,XY,+21: Trisomía del cromosoma 21 (Síndrome de Down, varón).
  • 47,XX,+18: Trisomía del cromosoma 18 (Síndrome de Edwards).
  • 47,XX,+13: Trisomía del cromosoma 13 (Síndrome de Patau).

Anomalías Estructurales

Las anomalías estructurales alteran la estructura de los cromosomas.

• Anomalías en un único cromosoma:
  • Deleción:
    • 46,XX,del(9)(q22): Mujer con deleción terminal del brazo largo del cromosoma 9 (punto de rotura en q22).
    • 46,XY,del(2)(q21q32): Varón con deleción intersticial del brazo largo del cromosoma 2 (puntos de rotura en q21 y q32).
• Anomalías en dos cromosomas (translocaciones):
  • 46,XY,ins(10;3)(q22;p13p23): Varón con inserción en el cromosoma 10 (banda q22) del segmento p13p23 del cromosoma 3.

Mosaicismos

En los mosaicismos, la fórmula cromosómica comienza con «mos» y describe todas las líneas celulares, separadas por «/». Se inicia con las líneas anormales y se termina con la normal.

Ejemplos de Anomalías Cromosómicas

1. Anomalías Numéricas

a. En Cromosomas Sexuales

• Síndrome de Turner (45,X)
• Síndrome del duplo Y (47,XYY)
• Síndrome de Klinefelter (47,XXY)

b. En Autosomas

• Síndrome de Down (47,XX,+21 o 47,XY,+21)
• Síndrome de Edwards (47,XX,+18 o 47,XY,+18)
• Síndrome de Patau (47,XX,+13 o 47,XY,+13)

2. Anomalías Estructurales

a. Deleciones

• Síndrome Cri du chat o síndrome del maullido de gato: 46,XX,del(5)(p14) o 46,XY,del(5)(p14)
• Síndrome de Prader-Willi: 46,XX,del(15)(q11q13) o 46,XY,del(15)(q11q13)
• Síndrome de DiGeorge: 46,XX,del(22)(q11.2) o 46,XY,del(22)(q11.2)

b. Translocaciones

• Leucemia mieloide crónica (cromosoma Philadelphia): 46,XX,t(9;22)(q34;q11.2) o 46,XY,t(9;22)(q34;q11.2)

c. Duplicaciones

• Enfermedad de Charcot-Marie-Tooth: 46,XX,dup(17)(p12) o 46,XY,dup(17)(p12)

Técnicas de Cultivo Celular en Citogenética

Cultivo Corto

1. Cultivo de vellosidades coriales en placa de Petri con medio de cultivo completo (24-48 horas, 37 ºC, 5% CO2).
2. Adición de colchicina o colcemid para detener las mitosis en metafase.
3. Trasvase a tubo cónico, eliminación del medio y adición de solución hipotónica.
4. Fijación y lavados con fijador (ácido acético y alcohol).
5. Disgregación del tejido (ácido acético al 60% y agitación mecánica).
6. Goteo de la suspensión celular sobre portaobjetos limpios.

Cultivo Largo

1. Disgregación enzimática de la vellosidad (pronasa y colagenasa).
2. Siembra de la suspensión celular en placas de Petri o frascos roux con medio de cultivo completo.
3. Incubación (37 ºC, 5% CO2, 4-5 días).
4. Control del crecimiento con microscopio invertido y cambios de medio.
5. Detención de mitosis en metafase con colchicina o colcemid.
6. Tripsinización y trasvase a tubo falcon cónico.
7. Choque hipotónico.
8. Fijación y lavado.
9. Goteo sobre portaobjetos.

Relación entre Alteraciones Cromosómicas y Cáncer

Las alteraciones cromosómicas, como translocaciones, inversiones, deleciones y aneuploidías, pueden desencadenar el cáncer a través de diversos mecanismos:

• Activación o sobreexpresión de oncogenes.
• Formación de proteínas quiméricas o genes de fusión.
• Pérdida de genes supresores de tumores.

Un ejemplo es el cromosoma Filadelfia [t(9;22)(q34;q11.2)], que genera el gen de fusión BCR/ABL, causando sobreexpresión del oncogén ABL.

Composición de los Medios de Cultivo Celular

Los medios de cultivo celular contienen componentes esenciales para el crecimiento y la supervivencia de las células.

• Glucosa: Fuente de energía.
• Sales minerales: Cloruro sódico, cloruro potásico, cloruro cálcico, bicarbonato sódico, entre otros. Regulan el pH y la presión osmótica.
• Tampón: Mantiene el pH estable. Se recomienda el uso de HEPES (10-20 mM) por su poder tamponador en el rango de pH óptimo (7,2-7,6).
• Aminoácidos: Esenciales y no esenciales, como la L-Glutamina.
• Vitaminas: Influyen en la tasa de crecimiento y supervivencia celular.
• Suplementos orgánicos de bajo peso molecular: Ácidos grasos esenciales, lípidos, nucleósidos, piruvato, etc.
• Indicador de pH: Rojo fenol (púrpura a pH 7,8, rojo a pH 7,4, naranja a pH 7 y amarillo a pH 6,5).
• Hormonas y factores de crecimiento: Esenciales para el crecimiento celular.
• Antibióticos y antifúngicos: Previenen la contaminación.