La traducción

es…… Es la síntesis de proteínas (polipétidos)
Mediante la formación de enlaces peptídicos entre …
dos aminoácidos formando largas cadenas que al comienzo tienen un extremo amino (N-terminal)
y al final un extremo carboxilo (C-terminal)
.

• TRADUCCIÓN

Preparación del inicio

               Aminoacil-tRNA sintetasas (20) ….Reconocen el amino ácido correcto que corresponde al tRNA cuyo anticodón, se unirá por complementaried- dad, precisamente al codón del mRNA. La acti -vación del aminoácido y su uníón al tRNA corr- recto mediante un enlace peptídico requiere energía proporcionada por  ATP (mediante dos enlaces ricos en energía)  que al hidrolizarse produce AMP y ppi.

De este modo queda unido un aminoácido al co-rrespondiente-tRNA reconocido por el anticodón

• B. Etapas

  
  

• INICIO: Se da cuando a través de 3 pasos

a)    El factor de inicio 3 (IF3) se une a la subu unidad ribosómica 30S, permitiendo así que el mRNA se una a la subunidad 30S.

b)   El IF2 se une al tRNA de inicio y a GTP (guanosina trifosfato) . El tRNA de inicio es el que está cargado con N-formil-metionina , una metionina modificada (fMet-tRNA_f^Met).

                _ El IF2 se une sólo al tRNA de inicio cargado, y   sin IF2 el tRNA de inicio no puede                       unirse a la subunidad pequeña del ribosoma_.

c)  Se reúnen los componentes producto de los  pasos (a) y (b) formando el comp- plejo de inicio de la traducción . Y luego, este, con la energía proporcionada por el GTP  hidrolizado a GDP + Pi _, se reúne con la subúnidad 50S y se liberan los   factores de inicio.

                               Al formarse el ribosoma 70S también se forman los sitios A y P ( Aminoacil a la derecha y Peptidil a la izquierda).

•   polipeptídica se requiere nuevamen- te EF-tu llevando tRNA cargado con aminoácido ( tRNA-aminoacilado) y unido a GTP. Para ello viene en ayu – da un factor de elongación ts (EF-ts)  que desplaza a GDP y a su vez el EF-ts  es  desplazado por un nuevo GTP;  queda el complejo listo para recibir un nuevo tRNA y prose- guir incorporando aminoácidos.
• 
  

  Formación del enlace peptídico

Los dos aminoácidos colocados en el  sitio  P y A  deben  encajar  el centro activo denominado   Peptidiltransferasa

Centro enzimático que cataliza un enlace peptidil entre el extremo (COOH) carboxi ilo de la N-formil metionina y el extremo amino (NH3) del segundo aa. Quedando el dipéptido unido en el sitio A.

• Translocación

  
  
• Consiste en el movimiento (5’→3’) del riboso ma en relación con el mRNA de modo que el dipéptido del sitio A se desplaza con el RNA mensajero al sitio P y el tRNA vacío sale ex– pulsado por el sitio de salida del ribosoma.
• Queda vacío el sitio A. Esto ocurre con la participación de la enzima translocasa o factor de elongación G (EFG) y la hidrólisis de un nuevo GTP a GDP + Pi
• Luego de la translocación queda vacío el sitio A listo a recibir el siguiente aminoácido.
  

• Terminación

  
  
• Ocurre cuando en el sitio A del ribosoma aparece uno de los tres codones sin sen- tido  que  va  ser  reconocido ya  sea por RF1 ó RF2
•        Participan dos factores de liberación (RF) o terminación: RF1 reconoce UAA y UAG ;  RF2  reconoce UAA  y  UGA,  la cadena polipéptídica completa y tRNA descargad do se liberan; probablemente la hidrólis- lisis de un GTP y el RF3 libera el mRNA.
• 
  

  El IF3 facilita la disociación de las sub unidades del ribosoma: al unirse a la subunidad 30S

• 
  

  Costo de la traducción :

Son cuatro enlaces fosfato ricos en energía por enlace peptídico: dos de un ATP durante la carga del tRNA con el aminoácido correcto, un GTP en la colocación del tRNA en el sitio A y otro GTP en la translocación

• Iniciación

  
  
  La subunidad pequeña del ribosoma se une a la regíón líder del ARNm y el ARNm se desplaza hasta llegar al codón AUG, que codifica el principio de la proteína. Se les une entonces  el complejo formado por el ARNt-metionina (Met)
  . La uníón se produce entre el codón del ARNm y el anticodón del ARNt que transporta la metionina (Met)
  .

• Elongación XI:

  
  Uníón del péptido Met-Gln-Cys con el 4º aminoácido, la leucina (Leu). Liberación del ARNt de la leucina.
  El ARNm se desplaza a la 5ª posición

• Finalización I:

  
  
  Liberación del péptido o proteína. Las subunidades del ribosoma se disocian y se separan del ARNm.
  

• MODIFICACIONES POST TRADUCCIONALES

Una vez establecida la estructura primaria, se van a formar puentes hidrógeno, interaciones hidrofóbicas e hidrofílicas, seguidas de esterificaciones, adquisición de cadenas literales y formación de puentes disulfuro entre císteínas intramoleculares.

• A)
  

  Modificaciones químicas simples

Acetilación en

           Lisina     de la Histona 3

Metilación en   Lisina     de la Histona 3

Hidroxilación en              Prolina  del Colágeno

Hidroxilación en              Lisina     del Colágeno

Fosforilación en               Serina, Tirosina y Treonina de la Glicógeno-

                                                                              -fosforilasa.

Carboxilación en             Glutamato          de la Protrombina.

N-formilación en             Glicina amino terminas de la melitina

• B)
  

  Glicosilación

  
  :uníón de un carbohidrato a una proteína           da una glicoprotéina. Son dos tipos:

O-Glicosilación, la uníón es a través del O del amino ácido de una treonina o serina en colágeno y otras

                               N.Glicosilación, la uníón es al átomo de nitrógeno del grupo amido de la asparragina en protrombina, colá- geno o protrombina. Ej.

Glicosilación def. De IgG en Fibrosis Quística

C)

Acilación

: adición de cadenas largas de ácidos grasos a proteínas, sea por esterificación o por adición de ácido mirístico o miristato en el N-terminal (de glicina).

PROCESAMIENTO PROTEOLÍTICO

. En melitina, tripsi -na, quimiotripsina, e insulina, y formación de poliproteí –nas (HORMONAS PEPTÍDICAS PRODUCIDAS POR LA PITUITARIA)
.

• EL CÓDIGO  GENÉTICO

• Código Genético

  
  
• Tripletes de nucleótidos codifican cada uno de los 20 aminoácidos o el inicio o el término de la cadena polipeptídica.
  
•   CarácterÍSTICAS:
•   1. El Código Genético  (CG)
  está escrito de manera lineal utilizando como “letras” las bases ribonu cleotídicas que componen las moléculas de RNA.  La secuencia ribonucleotídica proviene de las bases nucleotídicas complementarias del DNA.
•   2.  Cada “palabra” del mRNA contiene tres letras ribonucleotídicas a las que se denomina codón y cada especifica un aminoácido.
  
•   3.  El código no contiene ambigüedades, en el sentido de que cada triplete especifica solo un único aminoácido.
•   4.  El código es degenerado, en el sentido que un determinado aminoácido puede ser especificado por más de un codón.  Es así para 18 de los 20 aminoácidos.
•   5.  El código contiene codones señales de inicio y de fin de la transcripción.
•   6.  El  código no utiliza “comas”. Una vez que empieza la traducción del mRNA, los tripletes se leen ordenadamente y sin ninguna interrupción.
•   7.  El código no es solapado.
  Una vez que empieza la transcripción, cada ribonucleótido, en una posición específica en el mRNA, forma parte de un único codón.
•   8.  El código es casi universal
  .
  Salvo raras excepciones, caso todos los virus, procariotas, arqueas y  eucariotas usan un solo diccionario codificante.
• Ácidos NUCLEICOS
• Descubiertos  por Meischer (1868) en el nú -cleo de células de pus de allí su nombre.  Constituyen del 5 al 15% del peso seco de todas las células.
• 
  

  Definición

               Son polímeros denominados también poli- nucleótidos desempeñan un función central en la reproducción y el funcionamiento de todas las células y también virus.

• Las funciones específicas que cumplen, junto con un pequeño número de enzimas son :
•                a) en la dirección de la biosíntesis de todas las proteínas celulares;
  
•                b) en la constante replicación del DNA y finalm- mente de células originando células hijas idénticas;
  
•                c) en la adaptación de las células a los cambios fisiológicos y del medio ambiente;
  
•                d) en el registro de las mutaciones naturales o inducidas en la constitución genética de un organismo.
  
•                e) en la determinación de la gran variabilidad individual dentro de una especie.
  
• Su composición
  

  :

•                Las unidades monoméricasde los ácidos nucleicos son los nucleótidos que sirven para almacenar energía y para dar poder reductor a las células.
• 
  Los nucleótidos tienen tres componentes básicos :
  ácido fosfórico, un azúcar pen tosa (ribosa en el RNA y desoxiribosa en el DNA
  ) y una base nitrogenada púrica o pirimídica
  
• Las dos clases mayoritarias de purinas presentes en los ácidos nucleicos son la  guanina (G) y la adenina (A), mientras que las pirimidinas mayoritarias son tres, la citosina (C), la timina y el uracilo (U).
  
• 
  Las bases nitrogenadas por su naturale- za aromática heterocíclica, absorven en la regíón ultravioleta del espectro elec-  tro-magnético alrededor de 260 nm.
  
• El grupo funcional hidroxilo (OH)
  En la posición 2’ está ausente en el azúcar pentosa del DNA  .
  

• ESQUEMA DE LAS PENTOSAS

• Los nucleósidosson compuestos que tie-  nen la purina o pirimidina unida covalen-  temente al azúcar pentosa mediante en lace glucosídico.
  El enlace comprende el grupo OH (hemiacetal)
  De C1’ de la pen- tosa y el N9 de la purina  ó  N1 de la piri midina.
  
• Los nucleótidosson ésteres de los nu- cleósidos con el ácido fosfórico. Su este rificación naturalmente ocurre en el C5’
  
• ESQUEMA DE LAS BASES NITROGENADAS
   

  1º PURINAS

• ESQUEMA DE LAS BASES NITROGENADAS
   

  2º PIRIMIDINAS

• 
• Los nucleótidos están unidos covalente- mente unos a otros mediante enlaces fosfodiéster entre los azúcares de los nucleótidos adyacentes.
  Mientras que las bases nitrogenadas unidas a los azú cares covalentemente presentan cada una un espectro de absorción de luz UV carácterístico.
  

TIPOS DE Ácidos NUCLEICOS:

• ÁCIDOS RIBONUCLEICOS (ARNs)

  
  Conformado por una sola hebra; el azúcar ribosa y las bases nitrogenadas A, G, C y U
• Ácido DESOXIRIBONUCLEICO (ADN)
  
•                Conformado por doble hebra; el azúcar des oxiribosa y bases nitrogenadas :
  

  A, G, C y T

DOGMA CENTRAL DE LA Biología MOLECULAR:

El DNA tiene una función auto catalítica de replicarse y otra función heterocatalïtica de dirigir la síntesis de proteínas:

• Son propiedades fundamentales del DNA
• La complementariedad: la asociación es- pecífica entre las bases nitrogenadas:
  A con T mediante 2 puenteshidrógeno y G con C mediante 3 puentes H.
  
• La bidireccionalidad:
  
  hebras paralelas, en un extremo tienen P unido a C 5’ frente al OH del C 3’, mientras el otro extremo tiene OH del C 3’ frente al P del respectivo C 5’
• Las FUNCIONES FUNDAMENTALES del ADN son la Replicación y la Síntesis de Proteínas, mediante dos procesos : la transcripción y la traducción.
  

  (ARNs mensajero, transferente y ribosómico)

• 
  Además el ADN , cumple funciones en la mutación, en la recombinación y reparación.
•                Antes de 1953 la búsqueda fue intensa para hallar la molécula, la sustancia capaz de poseer los requisitos que debe cumplir el material genético.

El Modelo de Watson y Crick:

Tiene, –
Dos largas cadenas polinucleotídicas en rrolladas alrededor de un eje central, formando una doble hélice dextrógira.

•                –
  Las dos cadenas son antiparalelas, es decir la orientación C-5’ – C-3’ va en sentidos contrarios.
  
•                – Las bases nitrogenadas de las cadenas opuestas están apareadas específicamen te mediante puentes hidrógeno:
  
  

  2 entre A y T,  y 3 entre G y C

• Las bases (estructuras planas y perpen diculares al eje)
  De las dos cadenas es- tán “apiladas” unas sobre otras, separa
  – das 0.34 nm. Entre par y par, al interior de la estructura.
•                – Cada vuelta completa de la hélice tiene una longitud de 3.4 nm.
  Y contiene 10 bases.
•                – El diámetro de la doble hélice es 2 nm.
  
•                – En cualquier segmento de la molécula se observa un surco mayor y uno menor alternados a lo largo del eje.
  
• 
  

  ADN “B” Watson y Crick

• 10 pares de bases
• Diámetro 20 Aº
• Es dextrógira
• Las bases están perpendiculares
•     al eje de la hélice
• Surcos mayor y menor

FORMAS ALTERNATIVAS DEL ADN
 (En laboratorio)

• Técnica de difracción de rayos “X” 1950
• Técnica actual:
  Análisis de cristales simples por rayos X

ADN “A”

• 11 pares de bases en cada vuelta completa de la hélice;

Diámetro 23 Aº;

• Es dextrógira ;

Las bases están inclinadas con respecto al eje de la hélice

• ADN ”z”

  
  
• 12 pares de  bases en cada vuelta completa de la hélice

Diámetro 18 Aº

• Contiene solo pares de bases G – C en forma alterna
• Es levógiro
• Igual que los 2 anteriores consta de 2 cadenas anti paralelas
• Las bases adquieren una conformación en zig zag
• El surco mayor esta eliminado
• EL CÓDIGO  GENÉTICO

• REPLICACIÓN DEL ADN
• La replicación o Duplicación del ADN, ocurre cuando las dos cadenas se separan mediante el proceso de desenrrollamiento, de modo que cada una de ellas actúa como matriz de la cadena complementaria a formarse.
• Al final se formarán dos nuevas cadenas, una cadena paterna y otra hija, y ambas cadenas nuevas serán réplicas exactas de la cadena original
• replicación del DNA en procariontes es bidireccional porque las dos cadenas se sintetizan pero en direcciones opuestas
  
• La replicación del ADN es semiconservativa porque dicha  molécula tiene una hebra paterna y una hebra hija. Esto se sustenta en el experimento de Meselson y Sthal
  
• La replicación del DNA es asimétrica porque La cadena adelantada se sintetiza en forma continua y la cadena retrasada se sintetiza en forma discontinua

• Requerimientos para la replicación del DNA

Se necesita:

• Una plantilla o molde (hebra del DNA), d(NMP)n

  
  

• Magnesio (Mg2+)

  
  
• 
  

  Cuatro desoxiribonucleótidos trifosfatos (dNTP)

• 
  

  DNA polimerasa

1. ADN POLIMERASA

ADN POLIMERASA I

• Polimerización 5´ –
  

  3´

• Actividad exonucleasa 3´- 5 ´ y 5´- 3 ´

  
  
• Elimina el cebador de ARN
• Corrige errores durante el proceso de replicación
• Sintetiza y rellena los vacíos.
  

ADN POLIMERASA II

• Polimerización 5´ – 3´

  
  

• Actividad exonucleasa 3´- 5 ´

  
  

• Corrige los daños por agentes externos (luz U.V, sustancias químicas, etc.)

  
  

ADN POLIMERASA III (Holoenzima)

• Polimerización 5´- 3´

  
  

• Actividad exonucleasa 3´- 5 ´ y 5´- 3 ´

  
  

• Con el cebador inicia la síntesis de la cadena polinucleótida, para ello requiere energía (ATP)

  
  

CarácterÍSTICAS DE LA ADN POLIMERASA III

• Está formada por 2 juegos de 10 cadenas polipeptídicas (dímeros)
  
• Presenta las sub unidades
  

  :

  α,β, γδ, &épsilon;, θ,г,ψ,Ҳ
  
• El núcleo enzimático está formado por 3 sub unidades α,&épsilon;, θ, donde:
  
• 
  

         –

  α es responsable de la actividad polimerizadora
  
• 
  

         – 

  &épsilon; es la que posee la actividad exonucleasa 3´- 5´

• El núcleo enzimático está formado por 3 sub unidades α,&épsilon;, θ, donde:
  
• 
  

                  –

  α es responsable de la actividad polimerizadora
  
• 
  

                  – 

  &épsilon; es la que posee la actividad exonucleasa 3´- 5´
  

• ADN

  
  
• –
  β forma una anillo o abrazadera para evitar que el núcleo se separe de la cadena molde
  
• Las sub unidades δ, γ, &épsilon;, г,ψ,Ҳ están implicados en transportar la enzima sobre el ADN
  

• CEBADOR

  
  

• Es un segmento corto de ARN complementario al ADN y es sintetizado por la ARN polimerasa o Primasa

  
  

• Este segmento proporciona los extremos 3´OH libres. Para cada fragmento de Okazaki hay un cebador

HELICASAS

• Está formada por 3 proteínas: Dna A, Dna B y Dna C

  
  
• 
  

  Desenrrolla la molécula del ADN progenitor en el punto Orí-C

• Necesitan energía en forma de ATP para romper los puentes de H y desnaturalizar la doble hélice

  
  
• 
  

  Intervienen 2 tipos de helicasas:

• 
                  a) Tipo I (Proteína Rep): se une a la hebra progenitora 5´- 3´
•                 b) Tipo II: se une a la hebra progenitora 3´- 5´

PROTEÍNAS DE UníÓN A CADENA SENCILLA (SSBP)

• Estas proteínas se unen a las hebras molde para que no vuelvan a enrrollarse

  
  
• Eliminan la tensión generada por la torsión en el proceso de desenrrollamiento, cortando enlaces ésteres y volvíéndolas a unir
• Requiere energía liberada por la hidrólisis de ATP

TOPOISOMERASAS

• Eliminan la tensión generada por la torsión en el proceso de desenrrollamiento, cortando enlaces ésteres y volvíéndolas a unir
• Requiere energía liberada por la hidrólisis de ATP
  

• Hay 2 tipos:

  
  
• 
  

  A) Tipo I: Rompen una cadena de la hélice doble del ADN de células eucariotas

• b) Tipo II o Girasas: Rompen las dos cadenas y pasan otra hélice doble a través de rotura temporal en el ADN de células procariotas
• 
  

  . ADN LIGASA

• Catalizan la formación de enlaces fosfodiester entre los polinucleotidos preformados

  
  
• 
  

  ETAPAS DE LA REPLICACIÓN DEL ADN EN PROCARIONTES

INICIACIÓN: Desenrrollamiento del ADN en el Orí-C

• Las Helicasas se ubican en el Orí-C para desenrrollar las hebras del ADN formando la horquilla de replicación

  
  
• 
  

  Las proteínas SSBP se unen a las hebras molde para que no vuelva a enrrollarse

• Las Topoisomerasas  eliminan la tensión generada por la torsión en el desenrrollamiento de las hebras molde cortando los enlaces ésteres y uníéndolas después.

ELONGACIÓN: Síntesis de las hebras nuevas;  una en sentido 5´-3´(Hebra discontinua por  Fragmentos de Okazaki)  y la otra 3´- 5´ (Hebra continua)

• La ADN Polimerasa III …Con el cebador inician la síntesis de las hebras nuevas

  
  
• 
  

  La ADN Polimerasa II …Detecta daños por agentes físicos

• 
  

  La ADN polimerasa I ….Elimina a los cebadores y detecta errores durante el proceso

TERMINACIÓN: Corrección de errores

• Las ADN Polimerasas I y III por tener actividad exonucleasa 3´- 5´; cortan los segmentos erróneos

  
  
• 
  

  La ADN Polimerasa I sintetiza los segmentos correctos y rellenan los espacios en ambas hélices

• 
  

  La ADN ligasa une los extremos corregidos, igual lo hace con los fragmentos de Okazaki

TRANSCRIPCIÓN DEL ADN EN PROCARIOTAS

• La transcripción se produce cuando se transfiere el orden de las cadenas de nucleótidos del ADN a una secuencia de ribonucleótidos complementarios que es el ARN
• La transcripción es asimétrica porque solo una de las hebras del ADN se transcribe
  

• Ocurre en el citoplasma de las células

COMPONENTES DE LA TRANSCRIPCIÓN

• ADN MOLDE (La hebra 3´- 5´)

  
  
• 
  

  La regíón del ADN elegida por la enzima es de 60 pares de bases aproximadamente

• 
  

  En esta regíón están presentes dos secuencias concenso: -10 (TATAAT) y -35 (TTGACA)

• 
  

  UNIDAD DE TRANSCRIPCIÓN O ZONA PROMOTORA

• ARN POLIMERASA “HOLOENZIMA”

  
  

• Esta formada por una apoenzima y un cofactor

  
  

• La forma activa de la enzima (Holoenzima) esta compuesta por el núcleo y el factor sigma

  
  
• En núcleo esta compuesto por 4 sub unidades: 2α, 1β y 1β´
  

• El factor sigma reconoce a los promotores y tiene función reguladora en la iniciación de la transcripción

  
  

• No tiene actividad de corrección de errores

  
  

• La enzima es selectiva

  
  

• La enzima es protegida por las proteínas de choque térmico

  
  

• Región DE TERMINACIÓN

  
  
• Es una secuencia de bases nitrogenadas del ADN           que        al transcribirse al ARN forman horquillas que permiten            la transcripción: Son dos tipos:
• Independiente de Rho (Rho = proteína)
  
• No tiene proteínas
• Son ricos en Guanina y citosina
  

• Forma horquilla (estructura secundaria)

  
  
• 
  

  Tiene 6 residuos de uracilo en el extremo 3´

• No interviene en la separación del híbrido ( ADN – ARN)

  
  
• 
  

  ESTRUCTURA DE LA HORQUILLA QUE FORMA EL ARNm POR LA PRESENCIA DEL TERMINADOR INDEPENDIENTE DE RHO

• Dependiente de Rho (Rho = proteína)

  
  
• 
  

  Tiene proteínas (formadas por 6 subunidades idénticas)

• 
  

  No son ricos en Guanina y citosina

• Forma horquilla (estructura secundaria)

  
  
• 
  

  No tiene residuos de uracilo en el extremo 3´

• La proteína requiere ATP para deslizarse sobre la cadena de ADN

  
  

• Interviene en la separación del híbrido ( ADN – ARNm) cortando puentes de hidrógeno

• ESTRUCTURA DE LA HORQUILLA QUE FORMA EL ARNm POR LA PRESENCIA DEL TERMINADOR DEPENDIENTE DE RHO

  
  
• 

• 4. COFACTOR (Mg 2+ 0 Mn 2+)

  
  
• 
  

  Interviene en la reacción química como cationes

• 
  

  5. TOPOISOMERASA

• 
  

  Desenrolla las hebras del ADN

• CarácterÍSTICAS DEL ARNm

  
  
• Crece en sentido 5´- 3´
  
• Se inicia con un nucleótido de purina (ATP o GTP)
  
• Utiliza sustrato ribonucleósido trifosfato 5´
  
• Termina formando horquilla con una cola de uracilos
  
• El resultado final es un transcrito primario
  

• INTENSIFICADORES

  
  
•                 Son regiones del ADN que modulan la transcripción a distancia y son esenciales en la iniciación de la transcripción en ellas se adhieren proteínas que forman un lazo para unirse a la ARN polimerasa y al promotor

183

INICIACIÓN

A) COMPLEJO BINARIO CERRADO

• La holoenzima se une al promotor

  • No hay ruptura de los puentes de H+

• INTENSIFICADORES

  
  
•                Son regiones del ADN que modulan la transcripción a distancia y son esenciales en la iniciación de la transcripción en ellas se adhieren proteínas que forman un lazo para unirse a la ARN polimerasa y al
• 1. INICIACIÓN
• a) COMPLEJO BINARIO CERRADO
  
• La holoenzima se une al promotor
  

• No hay ruptura de los puentes de H+

• B) COMPLEJO BINARIO ABIERTO

  
  
• La holoenzima desnaturaliza localmente la doble hélice del ADN
• Hay ruptura de los puentes de  H⁺
• 
• c) COMPLEJO TERNARIO (Presencia del híbrido)
  
• 
  

  El factor sigma ordena al núcleo que inicie la transcripción

• Se agrega el primer nucleósido tri fosfato ( ATP o GTP) en sentido 5´- 3´
  

• Al agregarse 9 nucleósidos tri fosfatos, se inicia la elongación

• 2. ELONGACIÓN (Polimerización)

  
  
• Al agregarse 12 nucleósidos tri fosfatos, el factor sigma se disocia del complejo de transcripción.
  
• Continúa la polimerización de la hebra de ARN hasta que se especifique en el ADN la terminación
  
• 

• 3. Terminación

  
  
• Al desplazarse por el ADN, la ARN polimerasa encuentra una señal de parada o secuencia terminadora (dependiente de Rho o independiente de Rho)
  
• La ARN polimerasa detiene la transcripción ante la presencia de la horquilla (lazo y tallo) del ARNm
  
• Si no hay Rho, la hebra  del ADN se separa del ARNm a partir del extremo 3´ que contiene varios uracilos.
  
• Si hay Rho éste corta los puentes de Hidrógeno que une el ADN con el ARNm
  
• Se disocian los demás componentes

184

Biología MOLECULAR

• Definición:

  
  
• Disciplina científica con marcada  ten- dencia programática e interpretativa.
  
• Se propone explicar los fenómenos fundamentales  de la vida : herencia, crecimiento, desarrollo, diferencia- ción, excitabilidad, movimiento, etc., mediante la concepción moderna de átomo y molécula.

185

La

Biología Molecular, trata las fun- ciones de los sistemas biológicos.

(Freifelder, David)

• Francis JACOB (1969),  la considera como el resultado de la fusión de disciplinas :

  
  

– Bioquímica

– Genética

– Microbiología

–  Virología

–  Fisiología celular,

para interpretar fenómenos que se desarrollan en el seno de organismos vivos, entre sus estructuras e interrelaciones funcionales que se manifiestan dentro de los constituyentes celulares.  

• Origen

  
  

  :

Se desarrolla gracias a la convergencia de acontecimientos:

–

Invención del microcopio electrónico.

– Desarrollo de ramas de la ciencia,

I)    Genética,

Ii)   Bioquímica,

Iii)  fisiología celular

• Objetivo :

  
  

Es la elucidación de la naturaleza de las  transformaciones  químicas  y energéticas  carácterísticas  de

Los organismos vivos

• MÉTODOS Y TÉCNICAS

M. De Observación Directa

II.  M. Generales de Laboratorio

III M. De Separación e Identificación                     de Materiales

IV.  M.  Inmunológicos

V .   M.  Hidrodinámicos

VI.  M. Espectroscópicos

• Métodos de Observación directa

  
  
• Microscopia Óptica

– De campo claro

: diferencia de intensi                dad de la luz entre medio y objeto

De campo oscuro

: un diafragma oscuro              con un anillo trasparente,permite visua-

lizar y contar partículas pequeñas.

•                 – De contraste de fases:
  Permite visuali-              zar gotas de grasa, vacuolas mitocon-   drias, cromosomas, nucléolo.
  
• De interferencia
  

  : Se elimina el halo y es útil para mediciones cuantitativas

• 
  

  –

  De polarización
  : cuenta con un polari- zador, una platina rotatoria y un ana lizador. Se observa el fragmoplasto y estructuras moleculares orientadas.
  
• 
  

  –

  De fluorescencia
  : Compuestos fluores centes permiten visualizar ácidos nu cleicos, orgánulos pequeños, anti- cuerpos, e identificar cromosomas.
• 
  

  Microscopia Electrónica

Un cañón de electrones dirigidos por bobinas magnéticas (0.1 nm.)

2.1  Microscopio electrónico de  trans       misión TEM. (partc.Oro u osmio)

2.2   Microscopio electrónico de                                    barrido SEM, más pequeño y

  económico que el TEM.

• Mét. Generales de Laboratorio:

  
  

Medición de PH (potencial hidrógeno)

Marcado y Contaje Radioactivo

Autoradiografía: H³, C¹⁴ P³², S³⁵

Filtración por membrana

–  de nitrocelulosa

–  de fibra de vidrio

–  de colodión

• M. De Separación e Identificación de
    

  Materiales

  
  
  
• 
  

  Cromatografía : Fase Fija y Fase Móvil

• 
  

  – de reparto                              – cromatografía

• 
  

  – de adsorción                             líquida de alto

• 
  

  – de capa fina                              perfomance

• 
  

  – de gases                                        (HPCL )

  • de afinidad
  • de intercambio iónico.
    
  • 
    

    De fase reversa

• Electroforesis,

Desplazamiento de partículas en un disolvente mediante un campo eléc. Trico

A) Zonal,

B) En bloque :

–

En tiras de acetato de celulosa

– En papel

– En gel, en almidón, en poliacrila mida,  en agarosa

• Métodos inmunológicos

  
  
• Prueba de fijación de complemento.
  
• Pruebas de inhibición utilizando la fijación de complemento y la aglutinación pasiva.
  
• Pruebas de radioinmunoensayo.
  
• Pruebas inmunológicas con anticuerpos – fluorescentes conjugados con ferritina para localizar sustancias en moléculas, células y tejidos.
  
• 
  

  Métodos hidrodinámicos

• Utracentrifugación

  • Zonal
  • En gradiente de densidad.
• Determinación del coeficiente de
• difusión.
• 3.    Determinación del volumen específico parcial
  

  .

• 
  

  Métodos Espectroscópicos

• Espectroscopía de absorción
•     “                           “    fluorescencia
  

• Difracción de rayos X:

  
  revela estructu ra tridimensional con detalle atómico.
• Resonancia Magnética Nuclear:
• informa la estructura de polímeros bio                lógicos, las interacciones y movimien    tos moleculares y de átomos.