Microorganismos: Definición y Características

MO (Microorganismo): Toda entidad microbiológica, celular o no, capaz de reproducirse o transferir material genético.

• Capacidad de infección: Capacidad del material reutilizado para originar riesgo para el técnico u otros operarios en caso de manipular microorganismos patógenos.
• Virulencia de un MO: Grado de patogenicidad o gravedad de los daños que es capaz de causar.
• Agentes biológicos: Microorganismos susceptibles de originar cualquier tipo de infección, alergia o toxicidad.

Técnicas de Descontaminación, Desinfección y Esterilización

• Descontaminación: Aplicación de técnicas específicas que reducen drásticamente el número de microorganismos presentes o los eliminan por completo.
• Desinfección: Eliminación de los microorganismos capaces de infectar a un organismo vivo. Se realiza mediante:
  • Desinfectantes: Se aplican sobre material inerte.
  • Asépticos (Antisépticos): Se aplican para desinfectar manos, piel y mucosas.
• Esterilización: Eliminación de todos los microorganismos y sus esporas.
• Limpieza: Retirada de restos de sustancias del material.

Cabinas de Seguridad Biológica (CSB) y Niveles de Contención

CSB: Protección de muestras de cultivos frente a contaminación accidental. Su eficiencia se basa en el empleo de filtros HEPA (capaces de retener partículas pequeñas) y barreras o cortinas de aire (obligan al aire a fluir en una dirección determinada con un flujo bajo y constante).

Niveles y medidas de contención:

1. Barreras de contención primaria: Evitan la dispersión del microorganismo (cabinas de seguridad).
2. Barreras de contención secundaria: Protegen al trabajador de una posible infección (batas, guantes, gafas).
3. Barreras de contención terciaria: Encaminadas a proteger a la colectividad (zonas estancas).

Clasificación de los Microorganismos

Según su relación con el oxígeno:

• Aerobios estrictos: Necesitan oxígeno para crecer y mueren en su ausencia.
• Anaerobios facultativos: Pueden crecer utilizando o no oxígeno. Si está presente, lo utilizarán y obtendrán energía de manera más eficiente.
• Anaerobios aerotolerantes: Crecen sin emplear oxígeno, pero su presencia no les daña.
• Anaerobios estrictos: Crecen sin emplear oxígeno y mueren si están expuestos a este de forma prolongada.
• Microaerófilos: Necesitan un ambiente con 2-10% de O₂. Sufren daños en concentraciones normales.

Según su fuente de energía, carbono y electrones:

• Fuente de energía:
  • Foto-: Luz.
  • Quimio-: Compuestos químicos (inorgánicos u orgánicos).
• Fuente de carbono:
  • Auto-: CO₂.
  • Hetero-: Degradación de moléculas orgánicas.
• Fuente de electrones (H y e^–):
  • Lito-: Sustancias inorgánicas.
  • Organo-: Sustancias orgánicas.

Según la temperatura óptima de crecimiento:

• Psicrófilos: 0-20°C (óptima: 15°C).
• Psicrótrofos: 20-30°C.
• Mesófilos: 15-45°C (óptima: 20-45°C).
• Termófilos: 45-65°C (óptima: 55°C).
• Hipertermófilos: 55-90°C.

Según el pH óptimo de crecimiento:

• Acidófilos: pH 1-5.
• Neutrófilos: pH 5.5-8.5.
• Alcalófilos: pH 9-10.

Según la actividad de agua (a_w):

• Osmófilos: Crecen a valores bajos de a_w (hasta 0.6).
• Halófilos: Alta concentración de sal.
• Sacarófilos: Alta concentración de azúcar.
• Xerófilos: Medios secos.

Crecimiento Microbiano en Cultivo

Fases del crecimiento:

1. Fase de latencia: Periodo inicial tras la transferencia de células a un nuevo medio de cultivo. No hay aumento significativo de la población. Los microorganismos necesitan adaptarse al nuevo entorno.
2. Fase exponencial: Los microorganismos se multiplican a un ritmo constante. El número se duplica a intervalos regulares.
3. Fase estacionaria: Los nutrientes disponibles se agotan, lo que reduce el crecimiento. La tasa de muerte se equilibra con la de división.
4. Fase de muerte: Debido al agotamiento de reservas, las células empiezan a morir sostenidamente, provocando un descenso en la población.

Técnicas de Tinción

• Tinción simple:
  • Preparación del frotis sobre un portaobjetos.
  • Fijación del frotis.
  • Aplicación de colorante.
  • Uso de mordiente (opcional).
• Tinción negativa: Se utilizan colorantes aniónicos. La bacteria no se tiñe, pero el fondo sí (para observar la morfología externa y el tamaño).
• Tinción diferencial: Se utilizan dos colorantes para distinguir entre diferentes tipos de bacterias. Dos tipos principales:
  • Gram positiva (Gram+): Pared gruesa, se tiñe de violeta.
  • Gram negativa (Gram-): Pared delgada, se tiñe de rosa.

  Procedimiento de la tinción de Gram:

  1. Aplicación de colorante primario (cristal violeta).
  2. Adición de lugol como mordiente para fijar el colorante.
  3. Decoloración con alcohol-acetona para eliminar el exceso de colorante.
  4. Aplicación de colorante de contraste (safranina).

Mejora del Contraste en Microscopía Óptica

Factores que influyen en la calidad de la imagen:

• Enfoque.
• Aumentos.
• Resolución.
• Contraste: Se puede mejorar ajustando la intensidad de la luz, moviendo el condensador o utilizando el diafragma.

Parámetros de Incubación y Vías Metabólicas

• Parámetros de incubación: Temperatura, tiempo, luz, humedad relativa (%), concentración de O₂.
• Vía oxidativa: El aceptor final de electrones es el oxígeno.
• Vía fermentativa: El aceptor final de electrones es un compuesto orgánico y el proceso es anaerobio.

Denominación de Microorganismos (Ejemplos)

1. Microorganismo que presenta un crecimiento óptimo a 15°C y pH = 9.0: Psicrófilo alcalófilo
2. Microorganismo eucariota unicelular que se reproduce por gemación: Levadura
3. Microorganismo unicelular sin núcleo diferenciado: Procariota
4. Hongo septado con estructura micelar: Moho
5. Bacteria en forma de bastón que se tiñe de rojo en la tinción de Gram: Bacilo Gram negativo
6. Tipos de células con pared celular: Células vegetales, hongos, algas y la mayoría de las procariotas
7. Tipos de reproducción posibles en los hongos: Reproducción sexual y/o asexual
8. Posibles ciclos de vida de un virus: Ciclo lítico y ciclo lisogénico
9. Microorganismos que se desarrollan a valores de actividad de agua (a_w) bajos:Osmófilos
10. Virus (m.o. constituido solo por ADN o ARN): *Virus* (no se considera un organismo vivo en sentido estricto)

Agar Eosina Azul de Metileno (EMB)

El Agar Eosina Azul de Metileno (EMB) se emplea como medio diferencial para el aislamiento y diferenciación de bacterias entéricas Gram negativas. Contiene una mezcla de azul de metileno y eosina que inhibe el crecimiento de bacterias Gram positivas y permite diferenciar entre las bacterias capaces de fermentar lactosa y las que no. El medio EMB de Levine es una variante que se incuba en jarras de anaerobios (aunque no es estrictamente anaerobio, la reducción de oxígeno favorece la diferenciación).