Proteínas

Las proteínas son macromoléculas formadas por aminoácidos (a.a) unidos por enlaces peptídicos.

Estructura de las Proteínas

• Primaria: Secuencia de aminoácidos de una proteína.
• Secundaria: Ordenación regular y periódica en el espacio a lo largo de una dirección. Tres conformaciones: hélice α, lámina plegada y espiral al azar.
• Terciaria: Doblamiento o plegamiento sobre sí mismas de la estructura secundaria. Es exclusiva de cada proteína y da las propiedades biológicas.
• Cuaternaria: Unión de varias cadenas polipeptídicas.

Clasificación de las Proteínas

• Simples: Sólo contienen aminoácidos.
  • Globulares: Cadenas polipeptídicas plegadas con forma esférica o globular.
  • Fibrosas: Cadenas polipeptídicas ordenadas de forma paralela (fibras o láminas largas).
• Conjugadas: Proteínas con otras sustancias químicas.

Métodos de Determinación de Proteínas

• Kjeldahl: Detecta el contenido total de nitrógeno en una muestra.
• Biuret: Determina las proteínas séricas totales.
• Lowry: Reduce el ácido fosfotúngstico y fosfomolibdico a azul de tungsteno y azul de molibdeno.
• Absorción Ultravioleta: Se absorbe luz a 210 nm.
• Refractometría: Mide el índice de refracción.

Electroforesis de Proteínas

Técnica que separa las proteínas en función de su carga y tamaño mediante un campo eléctrico.

Tipos de Electroforesis

• Libre o Móvil: Utiliza un medio líquido.
• Zonal o de Soporte: Se realiza en un medio de soporte inerte.

Tipos de Soportes

• Gel de Poliacrilamida: Produce muchas bandas.
• Gel de Almidón: También produce muchas bandas.
• Papel: Para separar moléculas de pequeño tamaño.
• Acetato de Celulosa: Se obtienen 5-6 bandas.
• Gel de Agarosa: Método de elección, se obtienen 5-6 bandas.

Pasos de la Electroforesis

1. Separación electroforética.
2. Fijación al soporte.
3. Revelado con colorantes.
4. Decoloración.
5. Cuantificación de las fracciones.

Cuantificación de las Fracciones

• Elución: Se cortan las fracciones y se miden.
• Densitometría: Se cuantifica el colorante fijado en cada fracción.

Fracciones Electroforéticas

• α1-Globulinas: α1-Antitripsina, α1-Lipoproteína, α1-Glucoproteína, Protrombina, Globulina fijadora hormonas tiroideas.
• α2-Globulinas: α2-Macroglobulina, α2-Lipoproteína, Haptoglobina, Ceruloplasmina, Eritropoyetina.
• β-Globulinas: β-Lipoproteína, Transferrina, C3 y C4, Hemopéxina.
• Gamma-Globulinas: Inmunoglobulinas (Ig), Proteína C reactiva.
• Albúmina: Disminuye en deshidratación, enfermedad hepática, neoplasia, enfermedad renal y malnutrición.
• Fibrinógeno: Aparece en fracciones beta y gamma (si la muestra es plasma).

Alteración Patrón Electroforético

• Enfermedad Hepática: Disminución de albúmina, aumento de α2-globulina y gamma-globulina.
• Enfermedad Inflamatoria:
  • Aguda: Aumento de α1-globulina y α2-globulina, disminución de albúmina.
  • Crónica: Aumento de gamma-globulina, disminución de albúmina y α1, α2 y β-globulinas.
• Síndrome Nefrótico: Disminución de albúmina, aumento de α2-globulina.
• Gammapatía Monoclonal: Aumento de gamma-globulinas.
• Cirrosis Hepática: Disminución de albúmina, aumento de gamma-globulina.

Lipoproteínas Plasmáticas

Son sustancias insolubles en agua que contienen grupos polares y apolares.