Pruebas de Susceptibilidad Antimicrobiana
Principio y Antecedentes
El principio de las pruebas de difusión por disco se ha utilizado durante más de 70 años en los laboratorios. Alexander Fleming utilizó una variante de esta técnica cuando trabajaba con la penicilina en los años 50. Los doctores Bauer, Kirby, Sherris y Truck probaron minuciosamente todas las variables involucradas en procesos tales como: medios de cultivo, temperatura y espesor del agar.
Tipos de Pruebas
- Prueba de susceptibilidad por difusión en discos
- Prueba de susceptibilidad por dilución en caldo
- Prueba de susceptibilidad en dilución de caldo en microtubo
Prueba de Susceptibilidad por Difusión en Discos (Técnica de Kirby-Bauer)
Una suspensión estandarizada de la bacteria en estudio se siembra sobre la superficie de una placa de agar Muller-Hinton. Posteriormente, se colocan sobre la superficie del agar discos de papel de filtro impregnados con cantidades estandarizadas de agentes antimicrobianos. Luego del periodo de incubación, se mide el diámetro de la zona de inhibición.
El tamaño de la zona de inhibición es inversamente proporcional a la concentración inhibitoria mínima (CIM) de la bacteria y, mediante el uso de las tablas de referencia, se prepara un reporte cualitativo (sensible, intermedio o resistente).
Concentración Mínima Inhibitoria (CIM)
La CIM es la mínima concentración que inhibe la multiplicación y producción de un crecimiento visible de una cepa bacteriana dada en el sistema de prueba.
Preparación del Inóculo
Uno de los pasos más importantes en el proceso de la prueba es la preparación del inóculo. Esto involucra la selección de colonias apropiadas para la prueba, la suspensión en caldo y la estandarización de la suspensión.
Métodos:
- Suspensión directa de colonias
- Fase logarítmica de crecimiento
Interpretación de Resultados
Medición de las zonas de inhibición:
- Examinar determinadamente la placa para verificar que el crecimiento sea uniforme de tal modo que pueda identificar zonas sin crecimiento bacteriano.
Factores que afectan la actividad antibacteriana:
- Composición del medio de cultivo
- pH del medio
- Profundidad del agar
- Concentración del inóculo
- Contenido al antimicrobiano en el disco
- Almacenamiento de discos
- Temperatura de incubación, atmósfera de incubación
Detección de Mecanismos de Resistencia
Existen diferentes formas en que los microorganismos son resistentes a los antibióticos, entre esto se incluyen:
- Producción de enzimas que destruyen el agente antimicrobiano
- La pared celular se vuelve impermeable al agente antimicrobiano
- El sitio de ataque es alterado por mutación que ya no permite la unión del agente antimicrobiano
- La bacteria posee una bomba de expulsión bacteriana que expele al agente antimicrobiano de la célula antes de que este alcance su blanco
Resistencia a Macrólidos
La resistencia para macrólidos insosaminados y estreptogramina B están mediados por tres principales mecanismos:
- Mecanismos del sitio de acción (gen erm)
- Bomba de eflujo (gen msrA) e inactivación mph e InuA
- Modificación en el sitio de acción: generando así resistencia a eritromicina y una mutación de la sustancia
Detección de Resistencia Inducible a la Clindamicina
Se realiza un procedimiento denominado test de doble disco D-test. Este procedimiento consiste en colocar un disco de eritromicina y clindamicina con una separación de 15 mm de borde a borde en una placa previamente cargada con el microorganismo a estudiar.
En las cepas con resistencia inducible a clindamicina, observamos un achatamiento en el halo de inhibición de clindamicina (forma D). Una prueba positiva indica que ambos antibióticos deberán considerarse como resistentes.